Habilidades y métodos de uso del microscopio de fluorescencia.
Parámetros técnicos del microscopio de fluorescencia 1. Ocular gran angular 2. Objetivo acromático 3. Convertidor de objetivo de cuatro orificios 4. Dispositivo emisor de fluorescencia sistema de excitación azul (b) verde (g) Lámpara de mercurio de 100W 5. Coaxial grueso mecanismo de microenfoque: rango de enfoque 15 mm, valor de microrejilla 0,002 mm 6. Rango de movimiento longitudinal del banco de trabajo mecánico de doble capa: 70 mm, rango de movimiento lateral: 50 mm.
Habilidades y métodos de uso del microscopio de fluorescencia.
(1) portaobjetos de vidrio
El grosor de la diapositiva debe estar entre 0.8-1.2 mm y 1,2 mm. Un portaobjetos demasiado grueso no absorberá mucha luz, por un lado, y no hará que la luz de excitación se acumule en la muestra, por el otro. El portaobjetos debe ser liso, de espesor uniforme y libre de fluorescencia espontánea evidente. A veces se necesitan portaobjetos de vidrio Shi Ying.
(2) cubreobjetos
El cubreobjetos tiene aproximadamente 0.17 mm de grosor y es liso. Para mejorar la luz de excitación también se puede utilizar cubreobjetos de interferencia, que es un tipo de cubreobjetos especial con varias capas de sustancias (como por ejemplo fluoruro de magnesio) que tienen diferentes efectos de interferencia en diferentes longitudes de onda de luz. Puede hacer que la fluorescencia pase suavemente y refleje la luz de excitación, y esta luz de excitación reflejada puede excitar la muestra.
(3) Muestras
Las secciones de tejido u otras muestras no deben ser demasiado gruesas. Si es demasiado grueso, la mayor parte de la luz de excitación se consume en la parte inferior de la muestra, mientras que la parte superior observada directamente por el objetivo no se excita completamente. Además, la superposición de células o el enmascaramiento de impurezas afectan el juicio.
(4) agente sellador
Comúnmente se utiliza glicerol como agente sellador, que debe ser incoloro y transparente sin fluorescencia espontánea. El brillo de la fluorescencia es brillante a un pH de 8,5 a 9,5 y no es fácil que se desvanezca rápidamente. Por lo tanto, a menudo se utiliza como agente sellador una mezcla equivalente de glicerol y tampón de carbonato 0.5 mol/l PH9.0 ~ 9,5.
(5) aceite de espejo
Generalmente, se debe utilizar aceite para espejos al observar muestras con un microscopio de fluorescencia de campo oscuro y un espejo de aceite. Es mejor utilizar aceite especial para espejos no fluorescente o, en su lugar, se puede utilizar la glicerina anterior. También se puede utilizar parafina líquida, pero el índice de refracción es bajo, lo que tiene un ligero impacto en la calidad de la imagen.
