Requisitos para la producción de muestras de microscopio fluorescente.
(1) Portaobjetos de vidrio
El grosor de la diapositiva debe estar entre 0.8 y 1,2 mm. Si el portaobjetos es demasiado grueso, por un lado, absorbe más luz y, por otro lado, no puede provocar que la luz de excitación se acumule en la muestra. El portaobjetos debe ser liso, de espesor uniforme y libre de fluorescencia espontánea evidente. A veces se necesitan portaobjetos de vidrio de cuarzo.
(2) Portaobjetos de vidrio
El grosor del cubreobjetos es de aproximadamente 0.17 mm, que es liso y limpio. Para mejorar la excitación, también se puede utilizar un cubreobjetos de interferencia. Se trata de un cubreobjetos especialmente diseñado con varias capas de sustancias (como el fluoruro de magnesio) que tienen diferentes efectos de interferencia en diferentes longitudes de onda de luz. Puede permitir que la fluorescencia pase suavemente, mientras que la excitación por reflexión puede excitar la muestra.
(3) Muestra
Los cortes de tejido u otras muestras no deben ser demasiado gruesos, ya que la luz de excitación se consume principalmente en la parte inferior de la muestra, mientras que la parte superior observada directamente por el objetivo no está completamente excitada. Además, la superposición de células o el enmascaramiento de impurezas pueden afectar el juicio.
(4) Agente sellador
La glicerina se utiliza habitualmente como agente de montaje y debe estar exenta de fluorescencia espontánea, ser incolora y transparente. El brillo de la fluorescencia es más brillante a un pH de 8,5 a 9,5 y no es fácil que se desvanezca rápidamente. Por lo tanto, una mezcla igual de glicerol y tampón carbonato 0.5mol/l a pH 9.0-9.5 se usa comúnmente como agente sellador.
(5) Aceite para espejos
Al observar muestras utilizando un microscopio de fluorescencia de campo oscuro y un microscopio de aceite, es necesario utilizar aceite para lentes. Lo mejor es utilizar un aceite para lentes no fluorescente especialmente fabricado, que también puede sustituirse por glicerol como se mencionó anteriormente. También se puede utilizar parafina líquida, pero el índice de refracción es bajo y tiene un ligero impacto en la calidad de la imagen.
Precauciones al utilizar un microscopio de fluorescencia
(1) Siga estrictamente los requisitos del manual de fábrica del microscopio de fluorescencia y no cambie el programa arbitrariamente.
(2) La inspección debe realizarse en una habitación oscura. Después de ingresar al cuarto oscuro, conecte la fuente de alimentación y encienda la lámpara de mercurio de presión ultraalta durante 5 a 15 minutos. Después de que la fuente de luz emite una luz intensa y se estabiliza, los ojos se adaptan completamente al cuarto oscuro antes de comenzar a observar la muestra.
(3) Para evitar daños por rayos UV en los ojos, se deben usar gafas protectoras al ajustar la fuente de luz.
(4) El tiempo de inspección debe ser de 1-2 horas cada vez. Si supera los 90 minutos, la intensidad luminosa de la lámpara de mercurio de ultra alta presión disminuye gradualmente y la fluorescencia se debilita; Después de exponerse a radiación ultravioleta durante 3-5 minutos, la fluorescencia de la muestra también disminuyó significativamente; Por lo que no debería exceder las 2-3 horas como máximo.
(5) La vida útil de la fuente de luz del microscopio fluorescente es limitada y la muestra debe inspeccionarse de forma centralizada para ahorrar tiempo y proteger la fuente de luz. Cuando hace calor, se debe agregar un ventilador eléctrico para disipar el calor y enfriar. Al reemplazar una bombilla nueva, se debe registrar el tiempo de uso desde el principio. Cuando la lámpara se apaga y se quiere volver a utilizar, se debe esperar a que la bombilla se enfríe por completo antes de encenderla. Evite encender la fuente de luz varias veces.
(6) Observe la muestra inmediatamente después de la tinción, ya que la fluorescencia disminuye gradualmente con el tiempo. Si la muestra se almacena en una bolsa de plástico de polietileno a 4 grados, puede retrasar el tiempo de atenuación de la fluorescencia y evitar la evaporación del agente de montaje.
(7) El estándar de evaluación para el brillo de la fluorescencia generalmente se divide en cuatro niveles, a saber, "uno": ninguna fluorescencia o una fluorescencia débil visible. plus - Sólo se puede ver una fluorescencia claramente visible. plus plus - Visible con fluorescencia brillante. ' plus plus plus ' - Fluorescencia visible y deslumbrante.
