Requisitos para la preparación de muestras de rutina para microscopía
El microscopio confocal es un nuevo producto de alta tecnología que hace época, desarrollado en la década de 1980, y es uno de los instrumentos analíticos importantes en biología molecular y ciencias de la vida en la actualidad. La microscopía confocal se basa en imágenes de microscopio de fluorescencia con un dispositivo de escaneo láser agregado, utilizando una computadora para el procesamiento de imágenes para obtener imágenes fluorescentes de la microestructura dentro de las células o tejidos, y para observar cambios en la morfología de muchas máquinas de señales fisiológicas a nivel subcelular. Conviértase en una poderosa herramienta de investigación en los campos de la morfología, la biología celular molecular, la neurociencia, la farmacología, la genética y otros campos científicos.
La preparación de muestras para microscopía confocal es un paso crítico antes de la detección. Las muestras deben etiquetarse con sondas fluorescentes (sencillas, dobles, triples).
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Las muestras pueden ser tejidos fijos o vivos, o cultivos adherentes fijos o vivos. Las células deben cultivarse en placas de cultivo pequeñas especiales Confocal o cubreobjetos. Suspenda las células, agite o suelte los cortes y cúbralos con cubreobjetos. El grosor Zda de la muestra es de aproximadamente 1~2 mm, el grosor del cubreobjetos utilizado debe ser inferior a 0,17 mm y el grosor del portaobjetos debe estar entre 0,8~1,2 mm, y la superficie es lisa, el grosor es uniforme y no hay una fluorescencia de interferencia obvia. El medio de montaje se usa a menudo para muestras fijas y el glicerol preparado en PBS con un pH de 8.5-9 se usa comúnmente para el montaje.
Requisitos de preparación de muestras de rutina:
1. Selección de tintes
Dado que el microscopio confocal utiliza un láser de longitud de onda única como fuente de luz, la elección de los tintes fluorescentes debe basarse en la longitud de onda del láser equipado con el microscopio confocal. Si hay varios tintes fluorescentes en la misma muestra, también se debe considerar su longitud de onda de emisión tanto como sea posible. No superponga para evitar problemas de colores cruzados.
2. Selección del portamuestras
En general, la lente del objetivo de alta potencia del microscopio confocal es una lente de aceite, su apertura numérica es pequeña y la distancia de trabajo entre la lente y la muestra debe ser de no más de 0.17 mm. Los portaobjetos y los cubreobjetos están bien. Si se trata de células suspendidas o partículas suspendidas, se puede usar una placa de Petri dedicada a un microscopio confocal para transportar la muestra para su observación.
3. Selección del medio de montaje
Si la muestra solo necesita observarse una vez y la fluorescencia no se apaga fácilmente, puede elegir una determinada concentración de mezcla de glicerol para sellar el portaobjetos. Si es necesario colocar la muestra durante un período de tiempo y tomarla varias veces, se debe seleccionar un medio de montaje que suprima la fluorescencia para reducir la pérdida de señales fluorescentes.
