Principios, características y uso de la microscopía de fluorescencia.
El principio y las características estructurales de un microscopio de fluorescencia: un microscopio de fluorescencia utiliza una fuente de luz puntual de alta eficiencia luminosa, que emite una determinada longitud de onda de luz (como luz ultravioleta de 3650 pulgadas o luz ultravioleta azul de 4200 pulgadas) a través de un sistema de filtrado de color como luz de excitación. La sustancia fluorescente de la muestra se excita para emitir varios colores de fluorescencia y luego se observa mediante la ampliación del objetivo y el ocular. De este modo, incluso con una fluorescencia débil, es fácilmente reconocible y muy sensible en entornos de fuerte contraste, y se utiliza principalmente para estudiar la estructura y función celular, así como la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico común y algunos accesorios (como una fuente de luz fluorescente, un filtro de excitación, un separador de haz bicromático y un filtro de bloqueo, etc.). Fuentes de luz fluorescente: normalmente utilizan lámparas de mercurio de presión ultraalta (50-200W), que pueden emitir luz de varias longitudes de onda. Sin embargo, cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de luz de excitación que produce la fluorescencia más fuerte, por lo que es necesario agregar filtros de excitación (generalmente filtros de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde) para permitir que solo una cierta longitud de onda de luz de excitación pase e ilumine. la muestra, mientras absorbe el resto de la luz. Después de ser irradiada con luz excitada, cada sustancia emite fluorescencia visible con una longitud de onda más larga que la irradiación en un período de tiempo muy corto. La fluorescencia tiene especificidad y generalmente es más débil que la luz de excitación. Para observar una fluorescencia específica, es necesario agregar un filtro de bloqueo (o supresión) detrás de la lente del objetivo.
Tiene dos funciones: en primer lugar, absorbe y bloquea la entrada de luz de excitación al ocular para evitar alterar la fluorescencia y dañar los ojos; en segundo lugar, selecciona y permite el paso de una fluorescencia específica, mostrando un color de fluorescencia específico. Ambos tipos de filtros deben seleccionarse para usarse juntos.
