Principios y características estructurales de la microscopía de fluorescencia.
El microscopio de fluorescencia es el uso de una alta eficiencia luminosa de la fuente de luz puntual, a través del sistema de filtrado de color para emitir una determinada longitud de onda de luz (como ultravioleta 3650 o violeta-azul 4200) como luz de excitación, la excitación del material fluorescente dentro la muestra emite una variedad de diferentes colores de fluorescencia y luego se magnifica a través del objetivo y los oculares para su observación. De esta manera, en el fondo de fuerte contraste, incluso si la fluorescencia es muy débil, es fácil de identificar, alta sensibilidad, utilizada principalmente para el estudio de la estructura y función celular y la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico ordinario más algunos accesorios (como una fuente de luz de fluorescencia, filtros de excitación, separador de haz de dos colores y filtros de bloqueo, etc.). Fuente de luz fluorescente: generalmente se utiliza una lámpara de mercurio de presión ultraalta (50-200W), que puede emitir una variedad de longitudes de onda de luz, pero cada material fluorescente tiene una longitud de onda de excitación de fluorescencia más fuerte, por lo que es necesario agregar filtros de excitación (generalmente filtro de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde), de modo que solo una cierta longitud de onda de luz de excitación pasa a través de la irradiación de las muestras, mientras que la otra luz es absorbida. Por lo tanto, es necesario agregar un filtro de excitación (generalmente filtros de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde), de modo que solo una cierta longitud de onda de la luz de excitación atraviese la muestra, mientras que el resto de la luz sea absorbida. Cuando cada sustancia se irradia con luz de excitación, emite fluorescencia visible de una longitud de onda más larga que la de la luz irradiada en un tiempo muy corto. La fluorescencia tiene una especificidad, generalmente más débil que la luz de excitación, para poder observar la fluorescencia específica en la lente del objetivo, por lo que es necesario agregar un filtro de bloqueo (o supresión).
Su función es doble:
Una es absorber y bloquear la luz de excitación en el ocular, para no alterar la fluorescencia y dañar los ojos.
El segundo es seleccionar y dejar pasar la fluorescencia específica, mostrando un color fluorescente específico. Los dos tipos de filtros deben seleccionarse y utilizarse conjuntamente.
