Principio y características estructurales del microscopio de fluorescencia.
El microscopio de fluorescencia utiliza un punto con alta eficiencia luminosa para emitir luz con una determinada longitud de onda (como luz ultravioleta 3650 o luz violeta-azul 4200) a través del sistema de filtro de color como luz de excitación, y luego excita las sustancias fluorescentes en la muestra para que emitan fluorescencia con diferentes colores, y luego los observa a través de la amplificación del objetivo y el ocular. De esta manera, bajo un fondo de fuerte contraste, incluso si la fluorescencia es muy débil, es fácil de identificar y tiene una alta sensibilidad. Se utiliza principalmente para el estudio de la estructura y función celular y la composición química. La estructura básica del microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico común y algunos accesorios (como una fuente de luz fluorescente, un filtro de excitación, un divisor de haz dicroico y un filtro de bloqueo, etc.). Fuente de luz fluorescente: generalmente se utiliza una lámpara de mercurio de presión ultraalta (50-200W), que puede emitir luz con varias longitudes de onda, pero cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de luz de excitación que produce la fluorescencia más fuerte, por lo que es Es necesario agregar filtros de excitación (generalmente filtros de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde), de modo que solo se transmita a la muestra una determinada longitud de onda de luz de excitación y el resto de la luz se absorba. Después de que cada sustancia es irradiada por luz de excitación, emite una fluorescencia visible más larga que la longitud de onda de irradiación en muy poco tiempo. La fluorescencia tiene una especificidad que generalmente es más débil que la luz de excitación. Para observar la fluorescencia específica, es necesario bloquear (o suprimir) detrás de la lente del objetivo y deben usarse juntos.
Diferencia entre microscopio de fluorescencia y microscopio común
1. El modo de iluminación suele ser episódico, es decir, la fuente de luz se proyecta sobre la muestra a través de la lente objetivo;
2. La fuente de luz es luz ultravioleta con longitud de onda corta y resolución más alta que la del microscopio ordinario;
3. Hay dos filtros especiales, el que está frente a la fuente de luz se usa para filtrar la luz visible y el que está entre el ocular y la lente del objetivo se usa para filtrar la luz ultravioleta para proteger los ojos de las personas.
El microscopio de fluorescencia también es un tipo de microscopio óptico, la principal diferencia es que sus longitudes de onda de excitación son diferentes. Esto determina la diferencia entre el microscopio de fluorescencia y el microscopio óptico ordinario en cuanto a estructura y uso.
El microscopio de fluorescencia es la herramienta básica de la citoquímica de inmunofluorescencia. Se compone de fuente de luz, sistema de placa de filtro y sistema óptico. Utiliza luz con una determinada longitud de onda para excitar la muestra para que emita fluorescencia y la magnifica a través de la lente del objetivo y el sistema ocular para observar la imagen fluorescente de la muestra.
