Preparación y observación de muestras biológicas para microscopía electrónica.
La resolución del microscopio depende de la longitud de onda de la luz utilizada, el microscopio electrónico comenzó a aparecer en 1933 se debe al uso de una longitud de onda mucho más corta que la luz visible del haz de electrones como fuente de luz, de modo que la resolución Puede lograr que el microscopio óptico mejore enormemente. La diferente fuente de luz también determina una serie de diferencias entre el microscopio electrónico y el microscopio óptico.
De acuerdo con las diferencias en el principio de obtención de imágenes del haz de electrones y el papel de la muestra en las diferentes formas, el microscopio electrónico moderno se ha desarrollado para formar una serie de tipos, en la actualidad * comúnmente se utilizan el microscopio electrónico de transmisión y el microscopio electrónico de barrido. microscopio, el primero puede estar en el rango de 1,000-1,000,000 veces el aumento total del rango de cambios, el segundo puede estar en el aumento total del { {4}},000 veces la ampliación total de los cambios entre. Este experimento se centra en la preparación de muestras para los dos tipos de microscopios, microscopio electrónico de transmisión y microscopio electrónico de barrido.
Materiales
1. Cepa Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) inclinada.
2. Soluciones o reactivos Acetato de amilo, ácido sulfúrico concentrado, etanol anhidro, agua esterilizada, solución acuosa de ácido fosfotúngstico de sodio al 2% (pH 6.5-8.0), 0.3% Solución de polivinil formaldehído (disuelto en triclorometano), citocromo c, acetato de amonio, plásmido pBR322.
3. Instrumentos u otra parafernalia Microscopio óptico común, malla de cobre, embudo de porcelana, vaso de precipitados, plato plano, bureta estéril, pinzas estériles, lanceta, portaobjetos, ** placa de recuento, recubridor al vacío, secador de puntos críticos, etc.
Pasos de operación
(I) Preparación de muestras y observación de microscopía electrónica de transmisión.
1. Tratamiento de malla metálica
Las muestras para microscopía óptica se colocan en portaobjetos para su observación. Sin embargo, en la microscopía electrónica de transmisión, dado que los electrones no pueden penetrar la lámina de vidrio, sólo se puede utilizar como soporte un material de malla, normalmente llamado malla portadora. La malla portadora se puede dividir en muchas especificaciones diferentes debido a los diferentes materiales y formas, de las cuales la * comúnmente utilizada es la malla de cobre 200-400 (número de agujeros). La malla de cobre debe tratarse antes de su uso para eliminar la suciedad y mantenerla limpia; de lo contrario, afectará la calidad de la película de soporte y la claridad de las fotografías de la muestra. La malla de cobre utilizada en este experimento es malla 400, la cual se puede tratar de la siguiente manera: primero se blanquea con acetato de amilo durante unas horas, luego se enjuaga con agua destilada varias veces y luego se blanquea con etanol anhidro durante deshidración. Si la malla de cobre por el método anterior aún no está limpia, se puede utilizar para diluir ácido sulfúrico concentrado (1:1) sumergido en 1 ~ 2 minutos, o en una solución de NaOH al 1% hervida durante varios minutos, enjuagada varias veces con agua destilada. , colocado en deshidratación de etanol anhidro, para ser utilizado.
2. Preparación de la película de soporte.
Durante la observación de muestras, la red de soporte también debe cubrirse con una capa de película uniforme y no estructurada, de lo contrario se escaparán pequeñas muestras por los orificios de la red de soporte; esta capa de película se suele llamar película de soporte o película de soporte. La película de soporte debe ser transparente a los electrones y su espesor generalmente debe ser inferior a 20 nm; bajo el impacto del haz de electrones, la película también debe tener un cierto grado de resistencia mecánica, poder mantener la estabilidad de la estructura y tener buena conductividad térmica; Además, la red de soporte no debe tener una estructura visible bajo el microscopio electrónico, no tiene reacción química con la muestra transportada, no interfiere con la observación de la muestra y su espesor es generalmente de aproximadamente 15 nm. La película de soporte puede estar hecha de una película de plástico (por ejemplo, una película de algodón resistente al fuego, una película de polietileno y formaldehído, etc.), una película de carbono o una película metálica (por ejemplo, una película de berilio, etc.). En condiciones de trabajo rutinarias, los requisitos se pueden cumplir con una película de plástico, mientras que la preparación de la película de plástico en la película adhesiva de algodón resistente al fuego es relativamente fácil, pero la resistencia no es tan fuerte como la de la película de polietileno formaldehído.
