Preparación y observación de muestras biológicas para microscopía electrónica.
La resolución de un microscopio depende de la longitud de onda de la luz utilizada. El microscopio electrónico, que comenzó a aparecer en 1933, utiliza como fuente de luz un haz de electrones con una longitud de onda mucho más corta que la de la luz visible, por lo que la resolución que puede alcanzar es mucho mejor que la de un microscopio óptico. La diferencia en las fuentes de luz también determina una serie de diferencias entre los microscopios electrónicos y los microscopios ópticos.
De acuerdo con las diferencias en los principios de la obtención de imágenes por haz de electrones y las diferentes formas de actuar sobre las muestras, los microscopios electrónicos modernos se han desarrollado en muchos tipos. Actualmente, los más utilizados son los microscopios electrónicos de transmisión y los microscopios electrónicos de barrido. La ampliación total del primero puede estar entre 1000-1000000. El aumento total de este último puede variar entre 20 y 300,000 veces. Este experimento introduce principalmente la preparación de dos tipos de muestras de microscopio, microscopio electrónico de transmisión y microscopio electrónico de barrido.
2. Equipo
1. Bacteria Escherichia coli (Escherichia coli) inclinada.
2. Solución o reactivo acetato de amilo, ácido sulfúrico concentrado, etanol absoluto, agua esterilizada, solución acuosa de fosfotungstato de sodio al 2% (pH 6.5-8.0), 0.3% polietileno solución de formaldehído (soluble en cloroformo), células Pigmento c, acetato de amonio, plásmido pBR322.
3. Instrumentos u otros utensilios: microscopio óptico ordinario, malla de cobre, embudo de porcelana, vaso de precipitados, plato, gotero estéril, pinzas estériles, alfileres, portaobjetos, tablero de conteo, máquina de recubrimiento al vacío, secador de puntos críticos, etc.
3. Pasos de operación
(1) Preparación y observación de muestras para microscopía electrónica de transmisión.
1. Tratamiento de malla metálica
La muestra para microscopía óptica se coloca en un portaobjetos de vidrio para su observación. Sin embargo, en la microscopía electrónica de transmisión, dado que los electrones no pueden penetrar la lámina de vidrio, los materiales de malla sólo pueden usarse como soportes, generalmente llamados redes portadoras. La malla portadora se puede dividir en muchas especificaciones diferentes debido a los diferentes materiales y formas, entre las cuales la más comúnmente utilizada es la malla de cobre 200-400 (número de agujeros). La malla de cobre debe tratarse antes de su uso para eliminar la suciedad y mantenerla limpia; de lo contrario, afectará la calidad de la película de soporte y la claridad de las fotografías de la muestra. Este experimento utiliza una malla de cobre 400-, que se puede tratar de la siguiente manera: primero, remojarla y blanquearla con acetato de amilo durante varias horas, luego enjuagarla con agua destilada varias veces y luego remojarla en etanol absoluto durante deshidración. Si la malla de cobre aún no está limpia después de los métodos anteriores, puede remojarla en ácido sulfúrico concentrado diluido (1:1) durante 1 a 2 minutos, o hervirla en una solución de NaOH al 1% durante unos minutos, enjuagarla con agua destilada. agua varias veces, y luego ponerlo en anhidro Deshidratar en etanol y reservar.
2. Preparación de la membrana de soporte.
Al observar muestras, la red portadora también debe cubrirse con una capa de película uniforme y no estructurada, de lo contrario, pequeñas muestras se escaparán por los agujeros de la red portadora. Esta película suele denominarse película de soporte o película de soporte. La película de soporte debe ser transparente a los electrones y su espesor generalmente debe ser inferior a 20 nm; bajo el impacto del haz de electrones, la película también debe tener cierta resistencia mecánica para mantener la estabilidad estructural y tener buena conductividad térmica; Además, la red de soporte debe usarse en microscopía electrónica. No debe haber ninguna estructura visible debajo, ninguna reacción química con la muestra que se transporta y ninguna interferencia con la observación de la muestra. Su espesor es generalmente de unos 15 nm. La película de soporte puede ser una película de plástico (como una película de colodión, una película de polietileno formaldehído, etc.), una película de carbono o una película metálica (como una película de berilio, etc.). En condiciones normales de trabajo, la película plástica puede cumplir con los requisitos. Entre las películas plásticas, la película de colodión es relativamente fácil de preparar, pero su resistencia no es tan buena como la de la película de polietileno formaldehído.
