Requisitos de espesor del microscopio óptico para portaobjetos de vidrio
Deshidratación microscópica y fijación de muestras: debido a la centrifugación repetida, las células se pierden, por lo que es mejor fijar las células a la superficie de un portaobjetos de vidrio o lámina de plástico para microscopía óptica, de modo que las células se deshidraten y se sequen junto con el vidrio. tobogán o lámina de plástico. Requisitos para el grosor de los portaobjetos de vidrio en microscopía óptica Para permitir que las células se adhieran a portaobjetos de vidrio o láminas de plástico, primero es necesario colocar una capa de película sobre portaobjetos de vidrio o láminas de plástico. El método de colocación de la película es el siguiente:
(1) El método más simple para la microscopía óptica es colocar una capa delgada de película de polivinilo formal (formvar). Remoje los portaobjetos limpios en (0.5-1) porcentaje de solución de cloroformo de polivinilo formal. Después de que la atmósfera se volatiliza, aparece una película blanca en las diapositivas. Agite los portaobjetos varias veces en cloroformo para que cambie la película. Delgado y listo para usar.
(2) Coloque 0.1 latitud de poli-L-lisina (disuelva 1 mg de poli-lisina en 1 ml de agua filtrada durante la preparación) en el portaobjetos de vidrio limpio y colóquelo en una caja de suministro a 450 °C después de que se despliegue la gota. . seco. Este método es el mejor porque la poli-L-lisina está cargada positivamente, lo que permite que se adhieran más células cargadas negativamente a la superficie.
(3) Agregue plasma y glicerol al agua destilada en una proporción de (30--40) por ciento y (3-5) por ciento de acuerdo con los requisitos del microscopio óptico para el grosor del portaobjetos para formar una proteína de glicerol solución. El líquido se deja caer sobre el portaobjetos de vidrio limpio, se despliega y se seca bajo el microscopio óptico. La película de proteína colocada se sumerge en glutaraldehído al 2 por ciento para fijar la proteína, se lava y se seca para su uso posterior. Antes de usar, el plasma se deja caer sobre la película de proteína. Hágalo "activado", enjuague con tampón después de 30 minutos y se puede aplicar directamente.
Las células fijadas y limpiadas se convierten en una concentración adecuada de suspensión celular con agua filtrada bajo un microscopio digital, y el microscopio óptico se coloca en un portaobjetos de vidrio o lámina de plástico que se ha cubierto con una membrana, y se coloca en un lugar húmedo y bajo. temperatura (40C) ambiente ( 30-120) minutos para permitir que las células se adhieran a la membrana. Use pinzas finas para recoger el portaobjetos de vidrio y agítelo en agua doblemente destilada y lave las células sueltas con un microscopio óptico. Requisitos para el grosor de los portaobjetos en microscopios ópticos Los microscopios de polarización se colocan rápidamente en un recipiente lleno con un 50 por ciento de acetona (o etanol). El proceso de deshidratación consiste en poner los portaobjetos en acetona o etanol con una concentración creciente cada 3 minutos, y el microscopio óptico o aumentar continuamente la concentración del agente deshidratante en el recipiente de portaobjetos de vidrio. Según la experiencia de laboratorio del autor, esta última operación es más conveniente. El método específico de microscopía óptica puede succionar la mitad del agente deshidratante en el recipiente cada 3 minutos y luego agregar una cantidad igual de agente deshidratante con una concentración del 100 por ciento. Después de 5-6 operaciones, la concentración del agente deshidratante en el recipiente del precio del microscopio supera el 0,5 por ciento y las células se deshidratan con éxito. Después del secado en el punto crítico, el portaobjetos de vidrio o la lámina de plástico se pega al muelle de muestra con adhesivo conductor para recubrimiento de metal. También existen ventajas para unir células a membranas dispuestas por el tercer método. El microscopio óptico puede colgar las células fijadas por una baja concentración de glutaraldehído en la película de proteína "activada". El microscopio óptico requiere que el espesor del portaobjetos de vidrio se coloque durante 10 minutos, y el portaobjetos de vidrio o la lámina de plástico se sumerge en glutaraldehído al 2 por ciento. Después de 30 minutos, enjuague con agua bidestilada filtrada y luego deshidrate, seque y aplique una capa metálica de acuerdo con el método anterior.
