Notas y consejos sobre el uso de varios microscopios de contraste de fase
1) Instale el dispositivo de contraste de fase: retire la lente del condensador del microscopio ordinario e instale la lente del condensador con un diafragma anular en un microscopio correspondiente; retire la lente de objetivo ordinaria del microscopio y reemplácela con una lente de objetivo con una placa de fase; reemplace el ocular con oculares de enfoque para microscopios de contraste de fase; Se colocan filtros verdes especiales (a veces no necesarios) en la entrada de luz de la fuente de luz.
2) Alineación y enfoque de la luz: ajuste el ocular de enfoque y el tornillo de ajuste de espesor hasta que se vea claramente un círculo blanco y un círculo negro en el campo de visión. El círculo negro está fijo y el círculo blanco se puede mover ajustando el tornillo en el dispositivo condensador, de modo que el círculo negro y el círculo blanco coincidan completamente. Retire el ocular de enfoque y reemplácelo con el ocular original del microscopio para verificar.
Análisis de problemas en el uso del microscopio de contraste de fase
1. La influencia del grosor de la muestra Al realizar una observación de contraste de fase, el grosor de la muestra debe ser de 5 μm o menos. Cuando se usa una muestra más gruesa, la capa superior de la muestra es muy clara, pero la capa profunda se verá borrosa y causará interferencia por cambio de fase. y dispersión de la luz.
2. La influencia del cubreobjetos y el portaobjetos La muestra debe cubrirse con un cubreobjetos, de lo contrario, el anillo brillante del diafragma anular y el anillo oscuro de la placa de fase son difíciles de superponer. La observación de contraste de fase también tiene altos requisitos en cuanto a la calidad del vidrio del portaobjetos y el cubreobjetos. Cuando hay raspaduras, grosor desigual o irregularidad, se producirá una distorsión de anillo brillante e interferencia de fase. Además, cuando el portaobjetos es demasiado grueso o demasiado delgado, el anillo brillante del diafragma anular se hará más grande o más pequeño.
3. Halo y efecto de desvanecimiento En el proceso de obtención de imágenes del microscopio de contraste de fase, cuando una estructura se oscurece debido al retraso de fase, no es la pérdida de luz, sino el resultado de la redistribución de la luz en el plano de la imagen. Entonces, la luz que aparentemente se pierde en las áreas oscuras aparecerá como un halo brillante alrededor de los objetos más oscuros. Esta es una desventaja de la microscopía de contraste de fase, que dificulta la observación de estructuras finas, y el fenómeno del halo es más grave cuando el diafragma anular es muy estrecho. Otro fenómeno en la microscopía de contraste de fase es el efecto de sombreado, que se refiere a la pérdida de contraste en los bordes de un área más grande con el mismo retraso de fase cuando se observa por contraste de fase.
4. Inversión de fase Cuando n'n, el contraste claro y oscuro de la imagen es justo lo contrario, lo que se denomina inversión de fase. Es irreconocible cuando la diferencia de fase δ=0, y el contraste aumenta con el aumento de δ, y la inversión de fase aparecerá cuando δ continúe aumentando hasta un cierto valor. Cuando se utiliza una lente objetivo con un valor de absorbancia alto (alto contraste) del 90 por ciento, este valor de transformación es de aproximadamente 0,55 λ, y cuando se usa una lente objetivo con un valor de absorbancia estándar del 70 por ciento, es de aproximadamente 0,33 λ . Deben usarse objetivos con valores de absorbancia más altos para resolver diferencias de camino óptico más pequeñas.
