Aula de imágenes microscópicas 丨 Microscopio de fluorescencia de campo amplio
En las aplicaciones de imágenes de células vivas, la microscopía de fluorescencia de campo amplio facilita la observación de la dinámica de las células adherentes cultivadas en cámaras ambientales específicas colocadas en la platina del microscopio. En su configuración más básica, un microscopio de cultivo de tejidos invertido estándar equipado con iluminación de fluorescencia EPI está acoplado con un sistema detector de arreglo de área (generalmente una cámara CCD), filtros de fluorescencia adecuados y un sistema de obturador para limitar la exposición excesiva de las células a la luz de excitación dañina. . La microscopía de fluorescencia básica se basa en filtros de interferencia cuidadosamente combinados para seleccionar anchos de banda específicos para la iluminación y detección de la luz emitida. Las fuentes de luz incluyen lámparas de arco de mercurio, xenón y halogenuros metálicos, sistemas láser de expansión de haz y diodos emisores de luz (LED), todos los cuales requieren diferentes especificaciones de filtro. Los fluoróforos sintéticos utilizados en la microscopía de fluorescencia tienen espectros de emisión que cubren las regiones del ultravioleta cercano, el visible y el infrarrojo cercano. El uso de proteínas fluorescentes codificadas genéticamente ha ampliado en gran medida las capacidades de la microscopía de fluorescencia en la obtención de imágenes de células vivas, lo que permite a los investigadores apuntar con precisión a las regiones subcelulares de interés.
Nuohai LS 18, un nuevo tipo de microscopio de iluminación de hoja de luz desarrollado de forma independiente por Nuohai, está especialmente diseñado para obtener imágenes en 3D de alta resolución de muestras transparentes de tejido grande y está dedicado a explorar varios tejidos intactos, como el cerebro, el bazo y el intestino delgado. , riñón, pulmón, corazón y tumor. Estructura precisa en 3D de los órganos.
En la fluorescencia de campo amplio, la emisión de apertura total recopilada por el objetivo del microscopio maximiza la señal registrada y minimiza el tiempo de exposición requerido. Por lo tanto, las muestras se pueden visualizar con períodos de luz muy cortos. La principal desventaja de las imágenes de campo amplio es que la fluorescencia de las regiones alejadas del plano focal, así como la señal de fondo, es una luz no deseada que a menudo oscurece las características de interés. Por lo tanto, las imágenes de campo amplio producen los mejores resultados cuando las características de interés son grandes (como los orgánulos) o de naturaleza muy punteada. Una amplia variedad de muestras de células vivas, incluidas células adherentes, bacterias, levaduras y secciones de tejido muy delgadas, son candidatas ideales para la obtención de imágenes de fluorescencia de campo amplio; sin embargo, los tejidos más gruesos (más de 5 micras) se utilizan mejor con imágenes de métodos más avanzados.
Aunque ha habido muchos avances en la obtención de imágenes fluorescentes con colorantes fluorescentes sintéticos, puntos cuánticos y proteínas fluorescentes, en algunos casos resulta útil combinar la fluorescencia con otras modalidades de obtención de imágenes. Como ejemplo, DIC se puede usar junto con fluorescencia de campo amplio para monitorear la viabilidad celular y la morfología general mientras se estudian fenómenos de interés para objetivos marcados específicos. La adquisición de DIC y fluorescencia en una sola imagen generalmente no es práctica, pero en un microscopio configurado correctamente, las dos técnicas se pueden usar secuencialmente. Por lo tanto, después de obtener imágenes en el modo de epifluorescencia, las imágenes DIC se pueden adquirir a partir de muestras marcadas con fluorescencia usando luz transmitida. Las dos imágenes se pueden fusionar durante el análisis posterior. La adquisición simultánea de DIC e imágenes de fluorescencia es posible en configuraciones avanzadas de microscopios de campo amplio utilizando iluminación separada espectralmente (como visible e infrarrojo cercano) y adaptadores de cámara de doble cámara o de vista dividida. En la mayoría de los microscopios confocales de barrido láser, las imágenes se pueden adquirir en los modos de fluorescencia y DIC simultáneamente, lo que elimina la necesidad de un procesamiento posterior a la adquisición. El contraste de fase y el contraste de modulación de Hoffman también se pueden usar junto con la microscopía de fluorescencia de campo amplio. Sin embargo, en estas técnicas, la lente del objetivo es especial, ya sea un anillo de fase o una placa de modulación Hoffman, provocará una pérdida de intensidad de emisión de 5-15 por ciento.
Enlace del artículo: Red de equipos de instrumentos https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
