Medición de la cantidad microbiana: ¡método de conteo directo microscópico!
El crecimiento de las poblaciones bacterianas se caracteriza por un aumento del número de células o de un aumento del material celular. Existen varios métodos para medir el número de células, incluido el recuento microscópico directo, el recuento en placa, la turbometría por espectrofotómetro, el número más probable de MPN y la filtración por membrana. Los métodos para medir sustancias celulares incluyen medir el peso seco de las células, medir el contenido de ciertos componentes de las células, como nitrógeno, ARN y ADN, y medir los productos metabólicos. En resumen, existen muchos métodos para medir el crecimiento microbiano, cada uno con sus propias ventajas y desventajas, y la selección debe basarse en requisitos específicos del trabajo. Este experimento introduce principalmente el método de conteo directo mediante microscopio comúnmente utilizado en trabajos de producción e investigación científica.
Requisitos de propósito
1. Aclare el principio de utilizar una tabla de recuento de células sanguíneas para contar.
2. Dominar el método de utilizar un tablero de recuento de células sanguíneas para el recuento microbiano.
2, principios básicos
El método de conteo directo microscópico es un método simple, rápido e intuitivo para contar directamente una pequeña cantidad de suspensión de una muestra bajo un microscopio colocándola en un portaobjetos de vidrio especial con un área y volumen determinados (también conocido como contador bacteriano). En la actualidad, los dispositivos de recuento de bacterias comúnmente utilizados en el país y en el extranjero incluyen placas de recuento de células sanguíneas, dispositivos de recuento de bacterias Peteroff Hauser y dispositivos de recuento de bacterias Hawksley, todos los cuales se pueden utilizar para contar suspensiones de levaduras, bacterias, esporas de hongos, etc. con el mismo principio básico. Los dos últimos tipos de contadores bacterianos tienen un volumen total de {{0}}.02 mm3 después de cubrirse con un cubreobjetos, y la distancia entre el cubreobjetos y el portaobjetos es de solo 0,02 mm. Por lo tanto, se puede utilizar un objetivo de inmersión en aceite para observar y contar células más pequeñas, como las bacterias. Además de utilizar estos contadores bacterianos, también existe un método de estimación para observar directamente la relación entre el área de frotis y el área de campo bajo un microscopio, que generalmente se utiliza para el examen bacteriológico de la leche. Las ventajas del conteo directo con microscopio son intuitivas, rápidas y fáciles de operar. Pero la desventaja de este método es que los resultados medidos suelen ser la suma de células vivas y muertas. En la actualidad, existen algunos métodos que pueden superar este inconveniente, como combinar el cultivo en cámara de tinción de células vivas (tiempo corto) y agregar inhibidores de la división celular para lograr el objetivo de contar únicamente células vivas.
Usando un tablero de conteo de células sanguíneas como ejemplo para el conteo directo bajo un microscopio. Los métodos de uso de los otros dos contadores de bacterias se pueden encontrar en los manuales de varios fabricantes. El recuento directo bajo un microscopio utilizando una placa de recuento de células sanguíneas es un método comúnmente utilizado para el recuento microbiano. El tablero de conteo es un portaobjetos de vidrio hecho especialmente con cuatro ranuras que forman tres plataformas; La plataforma más ancha en el medio está dividida en dos mitades por una ranura horizontal corta y hay una rejilla a cada lado de la plataforma. Cada cuadrícula está dividida en nueve cuadrículas grandes, y la cuadrícula grande en el medio es la sala de conteo. La estructura de la placa de recuento de células sanguíneas se muestra en la Figura l{{0}}. La escala de la sala de recuento suele tener dos especificaciones. Una es que un cuadrado grande se divide en 25 cuadrados medianos y cada cuadrado se divide en 16 cuadrados pequeños (Figura 15-2); Otro método consiste en dividir un cuadrado grande en 16 cuadrados medianos y cada cuadrado se divide en 25 cuadrados pequeños. Sin embargo, independientemente del tamaño del tablero de conteo, hay 400 cuadrados pequeños en cada cuadrado grande. Si la longitud del lado de cada cuadrado es 1 mm, el área de cada cuadrado grande es lmm2. Después de cubrir con un cubreobjetos, la altura entre el cubreobjetos y el portaobjetos es de 0,1 mm, por lo que el volumen de la sala de recuento es de 0,1 mm3 (una milésima de mililitro). Figura 15-1 Estructura del tablero de conteo de células sanguíneas (I) Figura 15-2 Estructura del tablero de conteo de células sanguíneas (II) A Vista frontal; B. Vista en sección vertical; La cuadrícula ampliada tiene un cuadrado grande en el medio como sala de conteo 1. Tablero de conteo de células sanguíneas; 2. Cubreobjetos; Al realizar el conteo en la sala de conteo, el conteo bacteriano total generalmente se calcula para cinco cuadrados, luego se obtiene el valor promedio de cada cuadrado, multiplicado por 25 o 16 para obtener el conteo bacteriano total en un cuadrado grande, que luego se convierte en el recuento bacteriano total en la solución bacteriana de 1 ml. Suponiendo que el recuento bacteriano total en cinco cuadrículas cuadradas es A y el factor de dilución de la solución bacteriana es B. Si hay 25 placas de recuento en la cuadrícula cuadrada, el recuento bacteriano total en 1 ml de solución bacteriana es A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. De manera similar, si hay 16 placas de recuento en la cuadrícula cuadrada, el recuento bacteriano total en 1 ml de solución bacteriana es A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
