Introducción a las ventajas y desventajas de la microscopía de barrido láser multifotónica.
1. Al utilizar luz roja o luz infrarroja para excitar, la dispersión de la luz es pequeña y la dispersión de partículas pequeñas es inversamente proporcional a la cuarta potencia de la longitud de onda.
2. Se pueden recolectar más fotones dispersos de la sección transversal de imágenes sin necesidad de poros.
3. El orificio estenopeico no puede distinguir los fotones dispersos emitidos desde el área desenfocada o el área de enfoque, y la relación señal-ruido de las imágenes de fotones múltiples en capas profundas es buena.
4. La luz ultravioleta o visible utilizada para la excitación de un solo fotón es fácilmente absorbida y atenuada por la muestra antes de que el haz alcance el plano focal y es difícil excitar capas profundas.
5. En términos de observación con microscopio biológico, la primera consideración es no dañar el estado activo del propio organismo y mantener el flujo de agua, concentración de iones, oxígeno y nutrientes. En el caso de la observación de la luz, tanto el calor como la energía de los fotones deben permanecer dentro de la cantidad de irradiación y la energía de la luz para que las células no resulten dañadas.
6. La microscopía multifotónica tiene muchas ventajas. Como la resolución tridimensional, la penetración profunda, la eficiencia de dispersión, la luz de fondo, la relación señal-ruido, el control, etc., tienen características que los microscopios láser anteriores no tenían o no podían comparar.
Desventajas de la microscopía de barrido láser multifotónica:
1. Sólo puede visualizar fluorescencia.
2. Si la muestra contiene cromóforos que absorben la luz de excitación, la muestra puede sufrir daños térmicos.
3. La resolución se reduce ligeramente. Aunque se puede mejorar utilizando agujeros confocales al mismo tiempo, se produce una pérdida de señal.
4. Limitado por los costosos láseres ultrarrápidos, el costo de los microscopios de barrido multifotónicos es relativamente alto.
