Beneficios mejorados de la microscopía multifotónica de barrido láser
La microscopía multifotónica de barrido láser es una mejora importante de la microscopía óptica, principalmente para observar la estructura profunda de células vivas, células fijas y tejidos, y puede obtener estructuras de plano Z multicapa claras y nítidas, es decir, cortes ópticos, y puede construir La estructura sólida tridimensional del espécimen. El microscopio confocal utiliza una fuente de luz láser, que se expande para llenar todo el plano focal posterior de la lente del objetivo y luego converge en un punto muy pequeño en el plano focal de la muestra a través del sistema de lentes de la lente del objetivo. Dependiendo de la apertura numérica de la lente del objetivo, el diámetro del punto de iluminación más brillante es de aproximadamente 0.25 ~ 0.8 μm, y la profundidad es de aproximadamente 0.5 ~ 1,5 µm. El tamaño del punto confocal depende del diseño del microscopio, la longitud de onda del láser, las características de la lente del objetivo, el estado de configuración de la unidad de escaneo y la naturaleza de la muestra. Los microscopios de campo tienen un amplio rango y profundidad de iluminación, mientras que los microscopios confocales tienen iluminación concentrada en un punto focal en el plano focal. La ventaja más básica de la microscopía confocal es que puede realizar cortes ópticos finos de muestras fluorescentes gruesas (hasta 50 μm o más), con un espesor de aproximadamente 0,5 a 1,5 μm. Se puede obtener una serie de imágenes de sección óptica moviendo la muestra hacia arriba y hacia abajo con el motor paso a paso del eje Z del microscopio. La adquisición de información de la imagen se controla dentro de un plano preciso y no será interferida por señales de otras ubicaciones de la muestra. Después de eliminar el efecto de la fluorescencia de fondo y aumentar la relación señal-ruido, el contraste y la resolución de las imágenes confocales mejoran significativamente en comparación con las imágenes de fluorescencia con iluminación de campo tradicional. En muchos especímenes, muchos componentes estructurales intrincados están entrelazados para formar sistemas complejos, pero una vez que se puedan recolectar suficientes secciones ópticas, podemos reconstruirlas en 3D mediante software. Este enfoque experimental se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica para dilucidar las complejas relaciones estructurales y funcionales entre células o tejidos.
