Métodos de obtención de imágenes para campos brillantes y oscuros de microscopía de fluorescencia.
(1) Imágenes de campo brillante (BFI), que solo permite que los electrones transmitidos en la región paraxial pasen a través de la apertura del objetivo, formando una imagen oscura sobre un fondo brillante. Cuanto menor sea la apertura de la lente del objetivo, mayor será el contraste de la imagen del campo brillante; (2) Imágenes de campo oscuro (DFI), que solo permite que una parte de un haz disperso de gran ángulo o un haz de difracción de un cristal pase a través de la apertura de la lente del objetivo, mientras bloquea el haz transmitido. Esto crea una imagen gráfica brillante sobre un fondo oscuro. Este método de obtención de imágenes de campo oscuro puede mejorar el contraste de las imágenes y es un método de obtención de imágenes importante.
Existen aproximadamente cuatro métodos para que la microscopía de fluorescencia obtenga imágenes de campo oscuro: (1) mantener la iluminación vertical a lo largo del eje óptico mientras se mueve la apertura del objetivo; (2) El uso de iluminación oblicua para obtener haces dispersos en la dirección del eje óptico se denomina imagen de campo oscuro central (CDFI); (3) Una apertura de lente de objetivo con un bloqueo del haz central y un área transparente circular; (4) Utilice un foco circular transparente para detectar la luz y una apertura de objetivo con un orificio circular central. Los métodos * aquí son simples y convenientes, pero utilizan imágenes electrónicas en la región de la manga lejana, lo que produce grandes aberraciones y una calidad de imagen deficiente. El segundo método puede evitar los inconvenientes anteriores, pero la apertura del objetivo del microscopio de fluorescencia Leica sólo recibe una pequeña porción de electrones difractados dispersos, lo que resulta en una menor eficiencia. El lado de la apertura suele ser bombardeado por una gran cantidad de electrones, lo que fácilmente puede causar contaminación asimétrica y afectar la calidad de la imagen. El objetivo circular se ha mejorado en este sentido, pero la desventaja es que es difícil de realizar y es difícil lograr una simetría axial completa. Dados los requisitos relativamente relajados para el sistema de iluminación, se puede adoptar la última solución, que implica agregar una abertura circular en el condensador para proporcionar iluminación hueca para la muestra. El efecto de este dispositivo. Su resolución de imagen puede acercarse a la de las imágenes de campo brillante, mientras que el contraste mejora enormemente.
