En qué se diferencia la microscopía de fluorescencia de la microscopía confocal láser
microscopio de fluorescencia
1, el microscopio de fluorescencia consiste en utilizar luz ultravioleta como fuente de luz, que se utiliza para irradiar el objeto a examinar, de modo que emita fluorescencia y luego observar la forma del objeto y su ubicación bajo el microscopio. El microscopio de fluorescencia se utiliza para estudiar la absorción, transporte, distribución y localización de sustancias químicas en las células. Algunas sustancias de la célula, como la clorofila, pueden emitir fluorescencia después de la irradiación con luz ultravioleta; Hay algunas sustancias que no pueden emitir fluorescencia por sí mismas, pero si se tiñen con tintes fluorescentes o anticuerpos fluorescentes, también pueden emitir fluorescencia después de la irradiación con luz ultravioleta, y la microscopía de fluorescencia es una de las herramientas para la investigación cualitativa y cuantitativa de este tipo de sustancias.
2, principio del microscopio de fluorescencia:
(A) fuente de luz: la fuente de luz irradia varias longitudes de onda de luz (del ultravioleta al infrarrojo).
(B) fuente de filtro de excitación: a través de la muestra se puede producir fluorescencia de una longitud de onda de luz específica, al tiempo que se bloquea la excitación de la luz fluorescente inútil.
(C) Muestra fluorescente: generalmente teñida con un fluorocromo.
(D) Filtros de bloqueo: bloquean la luz de excitación que no es absorbida por la muestra para transmitir selectivamente la fluorescencia, y algunas longitudes de onda en la fluorescencia también se transmiten selectivamente. Un microscopio que utiliza luz ultravioleta como fuente de luz para hacer que el objeto irradiado sea fluorescente. El microscopio electrónico fue ensamblado por primera vez en 1931 en Berlín, Alemania, por Knorr y Haroska. Este microscopio utiliza un haz de electrones de alta velocidad en lugar de un haz de luz. Debido a que la longitud de onda de la corriente de electrones es mucho más corta que la onda de luz, el aumento del microscopio electrónico puede ser de hasta 800,000 veces, la resolución del límite mínimo de 0,2 nanómetros. . En 1963 se empezó a utilizar el microscopio electrónico de barrido, que permite observar en la superficie la diminuta estructura del objeto.
3, ámbito de aplicación: se utiliza para ampliar la imagen de objetos pequeños. Generalmente utilizado en biología, medicina, partículas microscópicas y otras observaciones.
microscopio confocal
1, microscopio confocal en la luz reflejada en la carretera más una mitad lente semirreflectante, habrá sido a través de la lente de la luz reflejada plegada en otras direcciones, en su enfoque en un deflector con un orificio, el orificio se encuentra en El foco, detrás del deflector, es un tubo fotomultiplicador. Se puede imaginar que la luz reflejada antes y después del punto focal de la luz del detector a través de este conjunto de sistema confocal no podrá enfocarse en el pequeño orificio y será bloqueada por el deflector. Así, el fotómetro mide la intensidad de la luz reflejada en el punto focal.
2, principio: el microscopio óptico tradicional utiliza una fuente de luz de campo, la imagen de cada punto de la muestra se verá interferida por la difracción o dispersión de la luz de los puntos vecinos; El microscopio confocal de escaneo láser utiliza un rayo láser a través del orificio de iluminación para formar una fuente puntual de luz en la muestra en el plano focal del escaneo de cada punto de la muestra, la muestra se irradia, en la detección del orificio en la imagen. , mediante la detección del orificio después del tubo fotomultiplicador (PMT) o del dispositivo de electroacoplamiento en frío (cCCD) punto por punto o punto por punto o punto por punto, se mide la intensidad de la luz mediante un fotómetro. cCCD) recibe punto por punto o línea por línea y forma rápidamente una imagen fluorescente en la pantalla del monitor de la computadora. El orificio de iluminación y el orificio de detección en relación con el plano focal de la lente objetivo están conjugados, el punto en el plano focal al mismo tiempo se enfoca en el orificio de iluminación y el orificio de emisión, el punto fuera del plano focal no estará en el orificio de detección en la imagen, de modo que la imagen confocal sea la muestra de la sección transversal óptica, superando las deficiencias de las imágenes borrosas de los microscopios comunes.
3, campos de aplicación: medicina, investigación animal y vegetal, bioquímica, bacteriología, biología celular, embriología de tejidos, ciencia de los alimentos, genética, farmacología, fisiología, óptica, patología, botánica, neurociencia, biología marina, ciencia de materiales, ciencia electrónica, mecánica, geología del petróleo, mineralogía.
