Funciones de cada filtro en un microscopio de fluorescencia
El problema más crítico de la microscopía de fluorescencia es la combinación de filtros ópticos. Tanto el filtro de excitación como el filtro de protección deben ser adecuados para el material fluorescente observado y combinarse entre sí. Para algunas aplicaciones específicas, si hay errores en la selección de filtros, puede dar lugar a malentendidos e incluso resultados incorrectos. Los logros de la tecnología de microscopía de fluorescencia son inseparables de filtros de alta-calidad y grupos de filtros inteligentemente combinados. Existen varios tipos de filtros para microscopía de fluorescencia.
1. Filtro absorbente de calor
El filtro absorbente de calor es un filtro necesario para evitar que la radiación térmica en el espectro de la fuente de luz dañe el sistema óptico. Los primeros microscopios avanzados estaban equipados con botellas en forma de tambor que podían contener agua destilada como dispositivos absorbentes de calor. Los microscopios de investigación modernos-a gran escala están equipados con filtros de vidrio absorbentes de calor en cajas de luz o cámaras de lámpara, que son láminas de vidrio transparentes y ligeramente amarillas. Los filtros KG1 (2 mm) y BG38 (4 mm) de Leitz pueden transmitir casi todos los espectros de luz ultravioleta y visible, con una tasa de transmisión de luz de hasta el 98%. Sólo absorbe selectivamente la radiación fototérmica infrarroja.
2. Filtro de excitación
Los filtros de excitación pueden absorber selectivamente líneas espectrales de longitud de onda larga y solo transmitir luz ultravioleta. Los filtros de luz violeta, azul y verde son filtros de excitación. Zeiss, Reichert, las series B de Olympus, las series G, las series BG, las series UG de Shott, las series H, G, BP de Opton, las series BP de Leitz y otros filtros ópticos son todos filtros de excitación.
3. Filtro de bloqueo
Un filtro de bloqueo es un filtro que absorbe selectivamente líneas espectrales de onda corta y rayos infrarrojos al tiempo que permite ver ondas más largas. Su función es permitir al observador ver la fluorescencia excitada por el objeto que se está inspeccionando, al tiempo que protege la córnea del observador del daño de los rayos UV.
4. Filtro de separación de colores
El filtro de separación de colores es un espejo de filtro que refleja la luz de excitación sobre el objeto que se inspecciona, lo que hace que el objeto emita fluorescencia y luego transmite la fluorescencia al ocular. Este tipo de filtro sólo se puede utilizar en un condensador de luz descendente, mientras que un microscopio de fluorescencia de luz transmitida no requiere separación de colores.
5. Filtro de interferencias
El filtro de interferencia es un tipo de filtro de excitación de alto-rendimiento. Es un filtro elaborado apilando varias películas finas de metal entre dos láminas de vidrio pulido. El índice de refracción de cada película metálica delgada es diferente, por lo que las líneas espectrales de varias longitudes de onda de la fuente de luz de iluminación se reflejan repetidamente en cada película metálica. Algunas líneas espectrales de determinadas longitudes de onda se anulan mediante interferencias destructivas, mientras que otras se refuerzan mediante interferencias aditivas y se transmiten. Esto da como resultado un filtro con un espectro de transmisión estrecho y un ancho de medio pico de sólo 6-20 nm. La transmitancia puede alcanzar el 60% -70%.
