Los microscopios de fluorescencia se pueden dividir en dos tipos según sus caminos ópticos.
1. Microscopio de fluorescencia de transmisión: la fuente de luz de excitación se utiliza para excitar la fluorescencia pasando el material de la muestra a través de una lente condensadora. También se pueden usar concentradores de campo oscuro de uso común, y se pueden usar concentradores comunes para ajustar el reflector para redirigir y hacer lóbulos laterales de la luz de excitación sobre la muestra. Este es un microscopio de fluorescencia relativamente antiguo-. Su ventaja es una fuerte fluorescencia a bajo aumento, pero su desventaja es que su fluorescencia disminuye al aumentar el aumento. Por lo tanto, es mejor para observar materiales de muestra más grandes.
2. El microscopio de fluorescencia de luz descendente es un nuevo tipo de microscopio de fluorescencia desarrollado en los tiempos modernos. A diferencia de lo anterior, la luz de excitación cae desde la lente del objetivo hacia abajo sobre la superficie de la muestra, utilizando la misma lente del objetivo como condensador de iluminación y lente del objetivo para recolectar la fluorescencia. Es necesario agregar un divisor de haz de dos colores al camino óptico, que está a 45 grados de distancia del uranio ligero. En ángulo, la luz de excitación se refleja en la lente del objetivo y se enfoca en la muestra. La fluorescencia generada por la muestra, así como la luz de excitación reflejada desde la superficie de la lente del objetivo y el cubreobjetos, ingresan a la lente del objetivo y regresan al divisor de haz de doble color, separando la luz de excitación y la fluorescencia. La luz de excitación residual es absorbida entonces por el filtro de bloqueo. Si se utilizan diferentes combinaciones de filtros de excitación/separadores de haz de color dual/filtros de bloqueo, pueden satisfacer las necesidades de diferentes productos de reacción fluorescentes. Las ventajas de este microscopio de fluorescencia son una iluminación de campo uniforme, imágenes claras y una fluorescencia más intensa con mayor aumento.
(2) Instrucciones para usar el microscopio de fluorescencia.
1. Encienda la fuente de luz; la lámpara de mercurio de ultra-presión ultraalta debe precalentarse durante unos minutos para alcanzar el punto brillante.
2. La microscopía de fluorescencia de transmisión requiere la instalación del filtro de excitación requerido entre la fuente de la lámpara y el condensador, y el filtro de bloqueo correspondiente detrás de la lente objetivo. El microscopio de fluorescencia de luz descendente necesita insertar el filtro de excitación/divisor de haz de color dual/bloque de filtro de bloqueo requerido en la ranura de la trayectoria óptica.
3. Observe con un microscopio de baja-potencia y ajuste el centro de la fuente de luz de acuerdo con el dispositivo de ajuste de diferentes tipos de microscopios de fluorescencia, de modo que quede ubicado en el centro de todo el punto de iluminación.
4. Coloque la muestra y enfóquela para observarla. Se debe prestar atención durante el uso: no observar directamente con los ojos antes de instalar el filtro para evitar daños a los ojos; Al observar muestras con un microscopio de aceite, se debe utilizar un microscopio de aceite especial no fluorescente; Una vez apagada la lámpara de mercurio de alta-presión, no se puede volver a encender inmediatamente. Se necesitan 5 minutos para reiniciar; de lo contrario, será inestable y afectará la vida útil de la lámpara de mercurio.
(3) Al observar bajo un microscopio de fluorescencia en una plataforma de enseñanza usando un filtro de luz azul violeta, se pueden ver células teñidas con tinte fluorescente naranja de acridina al 0,01%. El núcleo y el citoplasma se excitan para producir dos colores diferentes de fluorescencia (verde oscuro y rojo anaranjado).
