Métodos y precauciones de uso del microscopio de fluorescencia.
Metodo de uso:
(1) Coloque la hoja de material en la plataforma portadora.
(2) Encienda el regulador de voltaje del microscopio de fluorescencia. Luego presione el grupo de inicio para encender la lámpara UV, que no se apagará durante 15 minutos y no se reiniciará durante 3 minutos después de apagarla.
(3) Gire el filtro de excitación a v, la película dicroica a v, elija un filtro de bloqueo de 495 o 475 nm.
(4) Elija microscopía de lente objetivo receptora de fluorescencia uvFL40, uvFL100.
(5) Agregue aceite no fluorescente al portaobjetos, primero 40 x y luego 100 x para microscopía de enfoque. Mostrar fluorescencia.
(7) Debido a que el material fluorescente por irradiación ultravioleta con el crecimiento de la fluorescencia se debilitó gradualmente con el tiempo, el examen microscópico debe cambiar con frecuencia el campo de visión.
(8) también puede utilizar material de microscopía de bajo aumento uvFL10 o uvFL20 (con bajo aumento sin agregar aceite no fluorescente).
Método de grabación de imágenes de fluorescencia:
Imagen de fluorescencia vista por microscopio de fluorescencia, una es con características morfológicas, la segunda es con el color y brillo de la fluorescencia, al juzgar los resultados, los dos deben combinarse con un juicio integral. Los resultados se registran según indicadores subjetivos, es decir, mediante observación visual por parte del trabajador. Como observación cualitativa general, básicamente fiable. Con el desarrollo de la tecnología y la ciencia, en diversos grados, el uso de indicadores objetivos para registrar los resultados del juicio, como el uso de espectrofotómetro celular, analizador de imágenes y otros instrumentos. Sin embargo, los resultados registrados por estos instrumentos también deben combinarse con un juicio subjetivo.
La tecnología de fotografía con microscopio de fluorescencia es muy necesaria para grabar imágenes de fluorescencia, porque la fluorescencia es fácil de desvanecer y debilitar, para registrar instantáneamente los resultados de la fotografía. El método es básicamente el mismo que el de la micrografía ordinaria. Solo necesita usar una película fotográfica de alta velocidad como ASA200 arriba o 24. arriba. Debido a que la luz ultravioleta sobre el efecto de explosión de fluorescencia, como los marcadores FITC, en la irradiación de luz ultravioleta de 30 años, el brillo de la fluorescencia se redujo en un 50%. Por tanto, la velocidad de exposición es demasiado lenta para capturar la imagen de fluorescencia. Los microscopios de fluorescencia de investigación general tienen dispositivos de sistema de microfotografía semiautomáticos o completamente automáticos.
Precauciones:
(1) Opere estrictamente de acuerdo con los requisitos del manual de fábrica del microscopio de fluorescencia, no cambie el procedimiento arbitrariamente.
(2) La inspección debe realizarse en el cuarto oscuro. Después de ingresar al cuarto oscuro, conecte la fuente de alimentación, encienda la lámpara de mercurio de presión ultraalta durante 5-15 minutos, espere hasta que la fuente de luz emita una luz fuerte para estabilizarse y los ojos estén completamente adaptados al cuarto oscuro, y luego comience a observar el espécimen.
(3) Para evitar daños a los ojos por la luz ultravioleta, se deben usar gafas protectoras al ajustar la fuente de luz.
(4) Verifique el tiempo cada vez para que sea apropiado de 1 a 2 h, más de 90 minutos, la intensidad luminosa de la lámpara de mercurio de presión ultraalta disminuyó gradualmente y la fluorescencia se debilitó; muestras irradiadas con luz ultravioleta 3 ~ 5 min, la fluorescencia también se debilita significativamente; por lo tanto, * no será más de 2 ~ 3h.
(5) la vida útil de la fuente de luz del microscopio de fluorescencia es limitada, la muestra debe realizarse una inspección centralizada para ahorrar tiempo y proteger la fuente de luz. Cuando esté caliente, se debe agregar un ventilador de enfriamiento, se debe registrar una bombilla nueva desde el comienzo del uso. Cuando la lámpara se apaga y se quiere volver a utilizar, la bombilla debe enfriarse lo suficiente antes de encenderla. Se debe evitar la fuente de luz varias veces.
(6) Observe la muestra inmediatamente después de la tinción, ya que la fluorescencia disminuirá gradualmente con el tiempo. Si la muestra se coloca en una bolsa de plástico de polietileno almacenada a 4 grados, puede retrasar el tiempo de debilitamiento de la fluorescencia y evitar la evaporación del agente sellador.
(7) Criterios de valoración para el brillo de la fluorescencia: generalmente divididos en cuatro niveles, es decir, "uno": ninguna fluorescencia o una fluorescencia débil visible. '+': solo fluorescencia claramente visible. '+ +' - visible con un brillo
