Requisitos de preparación de muestras para microscopio de fluorescencia
(i) Diapositivas
El espesor del portaobjetos debe estar entre 0.8 y 1,2 mm; pendientes demasiado gruesas, por un lado, absorben más luz, por otro lado, no pueden provocar la excitación de la luz en la muestra recogida. El portaobjetos debe ser liso, de espesor uniforme y sin autofluorescencia evidente. A veces es necesario utilizar portaobjetos de vidrio de cuarzo.
(ii) cubreobjetos
Los cubreobjetos tienen aproximadamente 0.17 mm de grosor y son lisos. Para mejorar la excitación de la luz, también se puede utilizar para interferir con el cubreobjetos, que es una superficie especial revestida con varias capas de diferentes longitudes de onda de luz que desempeñan un papel diferente en la interferencia de sustancias (como el fluoruro de magnesio) de el cubreobjetos, que puede hacer que la fluorescencia sea suave y reflejar la excitación de la luz, el reflejo de la excitación de la luz hembra puede ser la excitación de la muestra.
(C) especímenes
Las secciones de tejido u otras muestras no pueden ser demasiado gruesas, ya que la luz de excitación demasiado espesa se consume principalmente en la parte inferior de la muestra y la lente del objetivo se observa directamente en la parte superior de la excitación insuficiente. Además, la superposición de células o las impurezas enmascaradas afectan el juicio.
(D) agente sellador
El agente sellador comúnmente usado es glicerol, no debe ser autofluorescente, incoloro y transparente, el brillo de la fluorescencia en pH 8,5 ~ 9,5 cuando es más brillante, no es fácil que se desvanezca rápidamente. Por lo tanto, se usa comúnmente glicerina y 0.5 mol/l pH9.0 ~ 9,5 del tampón de carbonato una cantidad igual de mezcla para el sellador.
(E) aceite de espejo
Microscopio de fluorescencia de campo oscuro general y observación de muestras de espejo de aceite, debe usar aceite de espejo, * buen uso de aceite de espejo especial no fluorescente, también se puede usar en lugar del glicerol anterior, también se puede usar parafina líquida, pero el índice de refracción es menor , la calidad de la imagen se ve ligeramente afectada.
