Explicación de las ventajas y desventajas de los microscopios de barrido láser multifotónicos
1. Excitada por luz roja o infrarroja, la dispersión de la luz es pequeña (la dispersión de partículas pequeñas es inversamente proporcional a la cuarta potencia de la longitud de onda).
2. No se necesitan poros y se pueden recolectar más fotones dispersos de la sección transversal-de imágenes.
3. Los poros no pueden distinguir los fotones dispersos emitidos desde áreas focales o desenfocadas, y los multifotones tienen una mejor relación señal-a-ruido en imágenes profundas.
4. La luz ultravioleta o visible utilizada para la excitación de un solo fotón es fácilmente absorbida y atenuada por la muestra antes de que el haz alcance el plano focal, lo que dificulta la excitación de capas profundas.
5. En términos de observación con microscopía biológica, la primera consideración es no dañar el estado activo del propio organismo y mantener la circulación de agua, concentración de iones, oxígeno y nutrientes. En el campo de la observación de la luz, tanto la energía térmica como la fotónica deben permanecer dentro de la dosis de irradiación y la energía luminosa que no dañe las células.
6. La microscopía multifotónica también tiene muchas ventajas. En términos de resolución tridimensional-, invasión de profundidad, eficiencia de dispersión, luz de fondo, relación señal-a{4}}ruido, control, etc., los microscopios láser tienen características incomparables o superiores que los microscopios láser anteriores no poseían.
El microscopio de escaneo láser confocal multifotónico se ha extendido a diversos campos de investigación y aplicación. Puede realizar observaciones tridimensionales no-destructivas en muestras en su estado natural y mejorar la resolución y la relación señal-a-ruido del sistema. Al utilizar los cambios en las propiedades del material después de la excitación multifotónica, también se puede lograr un almacenamiento de datos de altura tridimensional- y una microfabricación tridimensional en cualquier dirección, lo que tiene un alto valor de aplicación. Se cree que con el mayor desarrollo de las tecnologías mecánicas, de materiales y láser relacionadas con la microscopía confocal multifotónica, la microscopía de barrido láser confocal multifotónica tendrá un mayor desarrollo y aplicaciones más amplias.
Las desventajas son las siguientes:
1. Sólo para imágenes de fluorescencia.
2. Si la muestra incluye cromóforos que pueden absorber la luz de excitación, como pigmentos, la muestra puede estar sujeta a daños térmicos.
3. La resolución se reduce ligeramente, aunque se puede mejorar utilizando simultáneamente pequeños agujeros confocales, habrá pérdida de señal.
4. Debido a las limitaciones de los costosos láseres ultrarrápidos, el costo de los microscopios de barrido multifotónicos es relativamente alto.
