Diferencias entre la microscopía de fluorescencia y la microscopía confocal
microscopio de fluorescencia
1. El microscopio de fluorescencia utiliza la luz ultravioleta como fuente de luz para irradiar el objeto que se inspecciona, lo que hace que emita fluorescencia y luego observe la forma y la posición del objeto debajo del microscopio. La microscopía de fluorescencia se usa para estudiar la absorción, transporte, distribución y localización de sustancias dentro de las células. Algunas sustancias en células, como la clorofila, pueden fluorescarse cuando se exponen a la radiación ultravioleta; También hay algunas sustancias que no pueden emitir fluorescencia ellos mismos, pero también pueden emitir fluorescencia si se tiñen con colorantes fluorescentes o anticuerpos fluorescentes e irradiados con luz ultravioleta. La microscopía de fluorescencia es una de las herramientas para la investigación cualitativa y cuantitativa sobre tales sustancias.
2. Principio del microscopio de fluorescencia:
(A) Fuente de luz: la fuente de luz emite luz de varias longitudes de onda (desde ultravioleta hasta infrarrojo).
(B) Fuente de luz del filtro de excitación: luz de transmisión de una longitud de onda específica que puede causar fluorescencia en la muestra, mientras que bloquea la luz que es inútil para una fluorescencia emocionante.
(C) Muestras fluorescentes: generalmente teñidas con pigmentos fluorescentes.
(D) Filtro de bloqueo: transmite selectivamente la fluorescencia al bloquear la luz de excitación que no es absorbida por el espécimen, y algunas longitudes de onda en la fluorescencia también se transmiten selectivamente. Un microscopio que utiliza la luz ultravioleta como fuente de luz para hacer que el objeto iluminado emita fluorescencia. El microscopio electrónico fue ensamblado por primera vez por Knorr y Haruska en Berlín, Alemania, en 1931. Este microscopio utiliza haces de electrones de alta velocidad en lugar de vigas de luz. Debido a la longitud de onda mucho más corta del flujo de electrones en comparación con las ondas de luz, el aumento de un microscopio electrónico puede alcanzar 8 0 0000 veces, con un límite de resolución mínima de 0.2 nanómetros. El microscopio electrónico de barrido, que se usó por primera vez en 1963, permite a las personas ver las pequeñas estructuras en la superficie de los objetos.
3. Alcance de la aplicación: se usa para ampliar imágenes de objetos pequeños. Generalmente utilizado para observaciones de biología, medicina, partículas microscópicas, etc.
microscopio confocal
1. El microscopio confocal agrega una media lente semi reflectante a la ruta de la luz reflejada, que desvía la luz reflejada que ha pasado a través de la lente en otras direcciones. En su punto focal, hay un deflector con un agujero de alfiler ubicado en el punto focal, y detrás del deflector hay un tubo fotomultiplicador. Se puede imaginar que la luz reflejada antes y después del enfoque de la luz de detección no se puede centrar en el pequeño orificio a través de este sistema confocal y será bloqueado por el deflector. Entonces, el fotómetro mide la intensidad de la luz reflejada en el punto focal.
2. Principio: los microscopios ópticos tradicionales utilizan fuentes de luz de campo, y la imagen de cada punto en la muestra se ve afectada por difracción o luz dispersa desde los puntos vecinos; El microscopio confocal de escaneo láser utiliza un haz láser para iluminar un agujero de alfiler y formar una fuente de luz de punto para escanear cada punto en el plano focal de la muestra. El punto iluminado en la muestra se fotografia en el agujero de detección, y se recibe el punto por punto o línea mediante un tubo fotomultiplicador (PMT) o un dispositivo de acoplamiento en frío (CCCD) después de detectar el agujero de ras, formar rápidamente una imagen de fluorescencia en la pantalla del monitor de la computadora. El agujero de iluminación y el agujero de detección se conjugan en relación con el plano focal de la lente objetivo. Los puntos en el plano focal se centran simultáneamente en el agujero de la iluminación y el agujero de la emisión, y los puntos fuera del plano focal no se tomarán imágenes en el agujero de detección. La imagen confocal resultante es la sección transversal óptica del espécimen, que supera la desventaja de las imágenes borrosas en los microscopios generales.
