Diferencia entre microscopio de fluorescencia y microscopio óptico ordinario.
La diferencia entre el microscopio de fluorescencia y el microscopio óptico ordinario es diferente: el microscopio de fluorescencia y el microscopio óptico ordinario no se observan mediante la iluminación de una fuente de luz ordinaria, sino mediante el uso de una determinada longitud de onda de luz (generalmente ultravioleta, azul violeta). excitación de la muestra bajo el microscopio dentro del material fluorescente, de modo que emita luz fluorescente, por lo que el papel del microscopio de fluorescencia en la fuente de luz no es una iluminación directa, sino como una especie de estimulación de la fluorescencia del interior de las muestras. La fuente del microscopio de fluorescencia no es una iluminación directa, sino una fuente de energía para estimular la sustancia fluorescente dentro de la muestra. La razón por la que podemos observar la muestra no se debe a la iluminación de la fuente de luz, sino al fenómeno de fluorescencia que presenta la sustancia fluorescente en la muestra después de absorber la energía luminosa excitada. Se puede ver que las características del microscopio de fluorescencia son principalmente que su fuente de luz puede suministrar una gran cantidad de luz de excitación en un rango de longitud de onda específico, de modo que las sustancias fluorescentes dentro de la muestra examinada puedan obtener la intensidad necesaria de luz de excitación. Al mismo tiempo, el microscopio de fluorescencia debe disponer de un sistema de filtrado correspondiente. El microscopio de fluorescencia es la herramienta básica para la **histoquímica de fluorescencia. Se compone de una fuente de luz de presión ultraalta, un sistema de filtro (incluida la placa de filtro de excitación y supresión), un sistema óptico y un sistema fotográfico y otros componentes importantes; consiste en el uso de una determinada longitud de onda de luz para estimular la muestra para que emita fluorescencia.
1. La forma de excitación de la fluorescencia: según el rango de longitud de onda de la luz se divide en el método de excitación UV (usando iluminación ultravioleta) y el método de excitación BV (usando luz azul violeta). Dos tipos de métodos de excitación UV son más cortos que 400 nm cerca de la luz ultravioleta para excitación. No hay luz de excitación visible en este método, por lo que la fluorescencia observada muestra la fluorescencia inherente del tinte y es fácil distinguir la fluorescencia específica de la muestra de la autofluorescencia del tejido de fondo.
2. Método de excitación BV: el método se centra en 404 nm, 434 nm de luz ultravioleta a luz azul para la excitación. Este método utiliza luz azul para irradiar la muestra, por lo que el filtro de corte del sistema de observación de fluorescencia debe usar un filtro que pueda bloquear completamente la luz azul y pasar completamente la fluorescencia verde y amarilla deseada. Pigmentos fluorescentes para el método de anticuerpos fluorescentes. Dado que la longitud de onda de máxima absorción de la luz de excitación y la longitud de onda de máxima emisión de fluorescencia están cercanas entre sí, los filtros utilizados en el método de excitación BV deben ser filtros de corte agudo. Este método utiliza luz azul como luz de excitación, por lo que la eficiencia de absorción del fluorocromo es mayor y se puede obtener una imagen más brillante. La desventaja es que no se puede ver la fluorescencia por debajo de 500 nm y por encima de 500 nm toda la imagen aparece amarilla. En el método de anticuerpos fluorescentes, la mayor parte de la especificidad se juzga por el color exclusivo del fluorocromo, por lo que las desventajas del método de excitación BV descrito anteriormente tienden a ser extremadamente influyentes cuando se analiza la especificidad sutil.
