Diferencia entre microscopio de fluorescencia y microscopio confocal láser.
microscopio fluorescente
1. El microscopio de fluorescencia utiliza luz ultravioleta como fuente de luz, que se utiliza para irradiar el objeto detectado para que emita fluorescencia y luego observar la forma y posición del objeto bajo el microscopio. El microscopio de fluorescencia se utiliza para estudiar la absorción, transporte, distribución y ubicación de sustancias químicas en las células. Algunas sustancias de las células, como la clorofila, pueden volverse fluorescentes después de ser irradiadas con rayos ultravioleta; Otras sustancias no pueden emitir fluorescencia por sí mismas, pero sí pueden hacerlo después de teñirlas con tintes fluorescentes o anticuerpos fluorescentes e irradiarlas con rayos ultravioleta. El microscopio de fluorescencia es una de las herramientas para la investigación cualitativa y cuantitativa de estas sustancias.
2, principio del microscopio de fluorescencia:
(a) Fuente de luz: La fuente de luz irradia luz de varias longitudes de onda (desde ultravioleta hasta infrarroja).
(b) Fuente de luz del filtro de excitación: transmite luz con una longitud de onda específica que puede hacer que la muestra sea fluorescente, mientras bloquea la luz que es inútil para la fluorescencia de excitación.
(c) Muestras fluorescentes: generalmente teñidas con pigmentos fluorescentes.
(d) Filtro de bloqueo: bloquea la luz de excitación no absorbida por la muestra para transmitir selectivamente la fluorescencia, y algunas longitudes de onda en la fluorescencia también se transmiten selectivamente. Un microscopio que utiliza luz ultravioleta como fuente de luz para hacer que el objeto irradiado emita fluorescencia. El microscopio electrónico fue ensamblado por primera vez por Knohl y Ha Roska en Berlín en 1931. Este microscopio utiliza un haz de electrones de alta velocidad en lugar de un haz de luz. Debido a que la longitud de onda del flujo de electrones es mucho más corta que la de la onda de luz, el aumento del microscopio electrónico puede alcanzar 800 mil veces y el límite mínimo de resolución es de 0,2 nanómetros. El microscopio electrónico de barrido, que comenzó a utilizarse en 1963, puede hacer que las personas vean las pequeñas estructuras en la superficie de los objetos.
3. Ámbito de aplicación: se utiliza para ampliar la imagen de objetos pequeños. Generalmente se aplica a la observación de biología, medicina y partículas microscópicas.
microscopio confocal
1. El microscopio confocal agrega una semilente semirreflectante en la trayectoria óptica de la luz reflejada, que refracta la luz reflejada que ha pasado a través de la lente en otras direcciones. En su foco hay un deflector con un orificio, y el orificio está ubicado en el foco. Detrás del deflector hay un tubo fotomultiplicador. Se puede imaginar que la luz reflejada antes y después del foco de la luz de detección pasa a través de este sistema confocal y no se enfocará en el pequeño orificio, sino que será bloqueada por el deflector. Entonces el fotómetro mide la intensidad de la luz reflejada en el foco.
2. Principio: El microscopio óptico tradicional utiliza la fuente de luz de campo y la imagen de cada punto de la muestra se verá interferida por la difracción o la luz dispersa de los puntos adyacentes; El microscopio confocal de barrido láser escanea cada punto del plano focal de la muestra utilizando la fuente de luz puntual formada por el rayo láser que pasa a través del orificio de iluminación. Se obtienen imágenes del punto irradiado en la muestra en el orificio de detección, que se recibe punto por punto o línea por punto mediante un tubo fotomultiplicador (PMT) o un dispositivo acoplado en frío (cCCD) después de detectar el orificio, y se forma rápidamente una imagen fluorescente en la pantalla del monitor de la computadora. El orificio de iluminación y el orificio de detección están conjugados con respecto al plano focal de la lente objetivo, y los puntos en el plano focal se enfocan en el orificio de iluminación y el orificio de emisión al mismo tiempo, y los puntos fuera del plano focal no lo harán. ser fotografiado en el orificio de detección, de modo que la imagen confocal obtenida sea la sección transversal óptica de la muestra, lo que supera el defecto de imagen borrosa del microscopio común.
3. Campos de aplicación: medicina, investigación animal y vegetal, bioquímica, bacteriología, biología celular, tejidos y embriones, ciencia de los alimentos, genética, farmacología, fisiología, óptica, patología, botánica, neurociencia, biología marina, ciencia de los materiales, ciencia electrónica, mecánica, geología del petróleo y mineralogía.
