Determinación del número de microorganismos-Método de conteo directo microscópico!
El crecimiento de la población bacteriana se manifiesta por un aumento en el número de células o un aumento en el material celular. Los métodos para determinar el número de células incluyen recuento microscópico directo, recuento en placa, estimación de turbidez mediante espectrofotómetro, número más probable de NMP y filtración por membrana. (filtración por membrana), etc. Los métodos para medir sustancias celulares incluyen la determinación del peso seco de las células, la determinación de ciertos componentes celulares, como el contenido de nitrógeno, el contenido de ARN y ADN, y la determinación de los productos de metabolitos. En resumen, existen muchos métodos para medir el crecimiento microbiano, cada uno con sus propias ventajas y desventajas. El método debe seleccionarse de acuerdo con los requisitos específicos del trabajo. Este experimento presenta principalmente el método de conteo directo mediante microscopio que se usa comúnmente en trabajos de producción e investigación científica.
1. Requisitos de finalidad
1. Aclarar el principio del conteo con una placa de conteo de células sanguíneas.
2. Dominar el método de recuento de microorganismos mediante una tabla de recuento de células sanguíneas.
2. Principios básicos
El método de conteo directo por microscopio es un método simple, rápido e intuitivo que coloca una pequeña cantidad de suspensión de la muestra a analizar en un portaobjetos especial con un área y volumen determinados (también llamado bacteriómetro) y la cuenta directamente bajo un microscopio. Métodos. Actualmente, los bacteriómetros de uso común en el país y en el extranjero incluyen: hemocitómetro, bacteriómetro Peteroff-Hauser y bacteriómetro Hawksley, etc. Todos pueden usarse para contar levaduras, bacterias, esporas de moho y otras suspensiones, y los principios básicos son los mismos. Los dos últimos contadores bacterianos tienen un volumen total de 0.02 mm3 después de cubrirlos con un cubreobjetos, y la distancia entre el cubreobjetos y el portaobjetos es de solo 0,02 mm. Por lo tanto, se puede utilizar una lente objetivo de inmersión en aceite para observar y detectar células más pequeñas, como las bacterias. contar. Además de utilizar estos bacteriómetros, también existe un método de estimación que observa directamente la relación entre el área de frotis y el área del campo visual bajo un microscopio. Este método se utiliza generalmente para el examen bacteriológico de la leche. Las ventajas del método de conteo directo del microscopio son que es intuitivo, rápido y fácil de operar. Sin embargo, la desventaja de este método es que el resultado medido suele ser la suma de bacterias muertas y bacterias vivas. Actualmente existen algunos métodos para superar esta deficiencia, como combinar bacterias viables que tiñen cultivos en microcámaras (tiempo corto) y agregar inhibidores de la división celular para lograr el propósito de contar solo las bacterias viables.
Este experimento utiliza un hemocitómetro como ejemplo para realizar un recuento directo bajo un microscopio. Para el uso de los otros dos bacteriómetros, consultar las instrucciones de cada fabricante. El recuento directo al microscopio utilizando un hemocitómetro es un método de enumeración microbiana de uso común. El tablero de conteo es una corredera especial con cuatro ranuras que forman tres plataformas; la plataforma más ancha en el medio está dividida en dos mitades por una ranura horizontal corta, y hay una rejilla a cada lado de la plataforma. Cada cuadrícula está dividida en nueve cuadrados grandes, y el cuadrado grande en el medio es la sala de conteo. La estructura del tablero de conteo de células sanguíneas se muestra en la Figura {{0}}. Generalmente existen dos especificaciones para la escala de la cámara de recuento. Uno es un cuadrado grande dividido en 25 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano está dividido en 16 cuadrados pequeños (Figura 15-2); el otro es una gran plaza. La cuadrícula está dividida en 16 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano está dividido en 25 cuadrados pequeños. Sin embargo, no importa qué tipo de tablero de conteo sea, hay 400 cuadrados pequeños en cada cuadrado grande. La longitud del lado de cada cuadrado grande es lmm, luego el área de cada cuadrado grande es lmm2. Una vez cubierto el cubreobjetos, la altura entre el cubreobjetos y el portaobjetos es de 0,1 mm, por lo que el volumen de la cámara de recuento es de 0,1 mm3 (una diezmilésima de mililitro). Figura 15-1 Estructura del tablero de conteo de células sanguíneas (1) Figura 15-2 Estructura del tablero de conteo de células sanguíneas (2) A. Vista frontal; B. Sección longitudinal; cuadrícula cuadrada ampliada, el cuadrado grande en el medio es la cámara de conteo 1. Tablero de conteo de células sanguíneas; 2. Cubreobjetos; 3. Al contar en la cámara de conteo, generalmente cuente el número total de bacterias en cinco cuadrados, luego encuentre el valor promedio de cada cuadrado y luego multiplique por 25 o 16 para obtener. Luego, se convierte el número total de bacterias en un cuadrado grande. en el número total de bacterias en 1 ml de solución bacteriana. Supongamos que el número total de bacterias en los cinco cuadrados del medio es A y el factor de dilución de la solución bacteriana es B. Si se trata de una placa de recuento con 25 cuadrados del medio, entonces el número total de bacterias en 1 ml de solución bacteriana {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (piezas) De la misma manera, si es una placa de conteo de 16 cuadrados, el número total de bacterias en 1mL de solución bacteriana {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (piezas),,
