Determinación de la población microbiana: ¡método de recuento microscópico directo!
I. Requisitos del propósito
1, Aclarar el principio del recuento en placa de hematocrito.
2. Domine el método de recuento microbiano mediante placa de hematocrito.
II. Principios básicos
El método de conteo directo por microscopio consiste en una pequeña cantidad de suspensión de la muestra que se va a analizar en un portaobjetos especial con un área y volumen definidos (también conocido como contador bacteriológico), contando directamente en el microscopio un método simple, rápido e intuitivo. En la actualidad, los contadores bacteriológicos de uso común nacional y extranjero son: placa de recuento de células sanguíneas, contadores bacteriológicos Peteroff-Hauser y contadores bacteriológicos Hawksley, etc., que se pueden utilizar para levaduras, bacterias, esporas de moho y otras suspensiones de conteo, el principio básico. es el mismo. Los dos últimos tipos de contadores tienen un volumen total de 0.02 mm3 después de colocar el cubreobjetos, y la distancia entre el cubreobjetos y la porción portadora es de solo 0,02 mm, por lo que las celdas más pequeñas, como las Las bacterias se pueden observar y contar con un objetivo de inmersión en aceite. Además del uso de estos contadores, también existe un método de estimación de la relación entre el área de frotis y el área del campo de visión observado directamente bajo el microscopio, que se utiliza generalmente para el examen bacteriológico de la leche de vaca. Las ventajas del método de conteo microscópico directo son intuitivas, rápidas y fáciles de operar. Sin embargo, la desventaja de este método es que el resultado suele ser la suma de organismos vivos y muertos. Existen algunos métodos para superar esta desventaja, como la combinación de cultivos en microcámaras teñidos con bacterias vivas (tiempo corto) y la adición de inhibidores de citocinesis para lograr el propósito de contar solo organismos vivos.
Pasos de operación
1, preparación de suspensión bacteriana
Utilice solución salina estéril para preparar una suspensión bacteriana de levadura de cerveza con la concentración adecuada.
2, cámara de conteo de espejos
Antes de agregar muestras, primero se debe inspeccionar la cámara de recuento de la placa de recuento. Si hay suciedad, es necesario limpiarla y secarla con secador antes de contarla.
3, agregando muestras
Limpie y seque la placa de recuento de células sanguíneas cubierta con un cubreobjetos, y luego use una bureta capilar estéril para agitar la suspensión de levadura de cerveza desde el borde del cubreobjetos para dejar caer una pequeña gota, de modo que el líquido bacteriano a lo largo del espacio por penetración capilar en el cámara de conteo automáticamente, generalmente la cámara de conteo se puede llenar con líquido bacteriano. Al tomar muestras, primero se debe agitar bien la solución bacteriana; Al agregar muestras, la cámara de conteo no debe tener burbujas de aire.
4, conteo de microscopio
Después de agregar la muestra, déjela reposar durante 5 minutos, luego coloque la placa de recuento de células sanguíneas en la plataforma portamicroscopio, primero busque la ubicación de la cámara de recuento con bajo aumento y luego cámbiela a alto aumento para contar. Ajuste apropiadamente la intensidad de la luz del microscopio, ya que el microscopio con luz reflectora también debe prestar atención a que la luz no debe estar sesgada hacia un lado, de lo contrario, el campo de visión no será fácil de entender con la lengua, la línea de rejilla de la cámara de conteo clara, o Solo veo la línea vertical o solo veo la línea horizontal. Si se descubre que el líquido bacteriano es demasiado espeso o demasiado diluido antes de contar, es necesario reajustar la dilución antes de contar. Son apropiados los requisitos generales de dilución de la muestra de aproximadamente 5 a 10 bacterias en cada celda. Para cada cámara de recuento, se seleccionan para el recuento los organismos de 5 compartimentos intermedios (4 esquinas y un compartimento intermedio en el centro). Los organismos ubicados en las líneas de la cuadrícula generalmente se cuentan solo en las líneas superior y derecha. En el caso de la gemación de levadura, cuando el cuerpo en gemación alcanza la mitad del tamaño de la célula madre, se cuenta como dos organismos. Contar una muestra de las dos cámaras de conteo en el valor promedio para calcular el contenido bacteriano de la muestra.
5. Limpieza de la placa de hematocrito
Después de su uso, enjuague la placa de recuento de células sanguíneas con agua debajo del grifo, no use objetos duros para lavarla ni cepillarla, séquela usted mismo o use un secador de pelo para secarla después del lavado. Inspeccione microscópicamente la placa para ver si hay organismos residuales u otros precipitados en cada compartimento. Si no queda limpio se debe repetir el lavado hasta dejarlo limpio.
