Métodos y pasos de depuración para microscopía de contraste de fases.
a. Sobre la base del ajuste del sistema de iluminación de Kuhler, utilice el método de campo brillante para enfocar la muestra con claridad;
b. Gire el foco a Ph1 y alinéelo con la línea de escala del plato giratorio. Seleccione un objetivo de contraste de fase de 10 x y reemplácelo con la muestra transparente a observar;
do. Retire uno de los oculares, reemplácelo con un telescopio de centrado y enfoque en los dos anillos de contraste en el campo de visión (el anillo de contraste negro de la lente objetivo y el anillo de contraste de transmitancia de la lente condensadora);
d. Los dos anillos de diferencia en el campo visual pueden no coincidir necesariamente. Ajuste los dos dispositivos de ajuste en el foco (ajustando las posiciones izquierda y derecha de los anillos de diferencia con varillas de ajuste y perillas de fricción para ajustar las posiciones delantera y trasera), de modo que el anillo transparente se mueva hacia adelante y hacia atrás para coincidir con el anillo negro. ;
mi. Después del ajuste, vuelva al ocular de observación y presione el filtro verde en la trayectoria óptica para observar la imagen de diferencia de fase de la muestra;
F. Cuando se observa con objetivos de 20 x y 40 x, el foco debe colocarse en la posición Ph2, y cuando se utiliza un objetivo de 100 x, el foco debe colocarse en la posición Ph3.
Ámbito de aplicación: Adecuado para observar muestras transparentes, sin teñir o sin teñir, como diversas células, tejidos vivos, cortes de tejido sin teñir o sin teñir, organismos acuáticos, etc.
El principio básico del microscopio de contraste de fases.
Cuando la luz pasa a través de una muestra relativamente transparente, no hay cambios significativos en la longitud de onda (color) y la amplitud (brillo) de la luz. Por lo tanto, cuando se observan muestras no teñidas (como células vivas) bajo un microscopio óptico normal, su morfología y estructura interna suelen ser difíciles de distinguir. Sin embargo, debido a las diferencias en el índice de refracción y el grosor de las diferentes partes de la celda, habrá diferencias en la trayectoria óptica de la luz directa y difractada al pasar a través de esta muestra. A medida que la trayectoria óptica aumenta o disminuye, la fase de las ondas de luz en aceleración o retraso cambiará (lo que dará como resultado una diferencia de fase). La diferencia de fase de la luz no se puede sentir a simple vista, pero el microscopio de diferencia de fase puede utilizar su dispositivo especial: una apertura circular y una placa de fase, y utilizar el fenómeno de interferencia de la luz para transformar la diferencia de fase de la luz en una diferencia de amplitud. (diferencia de luz y oscuridad) que puede ser detectada por el ojo humano. Esto hace que el objeto originalmente transparente muestre diferencias obvias de luz y oscuridad, mejora el contraste y nos permite observar claramente células vivas y ciertas estructuras finas dentro de las células que no se pueden ver ni ver claramente con microscopios ópticos comunes y microscopios de campo oscuro.
El principio de obtención de imágenes de un microscopio de contraste de fases: la fuente óptica sólo puede pasar a través de un anillo transparente con una abertura circular, que luego se enfoca en un haz de luz. Cuando este haz de luz atraviesa el objeto que se está probando, sufre distintos grados de desviación (difracción) debido a los diferentes caminos ópticos de cada parte. Debido a que la imagen formada por el anillo transparente coincide con la superficie conjugada de la placa de fase y el plano focal detrás del objetivo. Por tanto, la luz directa que no se ha desviado pasa a través de la superficie conjugada, mientras que la luz difractada que se ha desviado pasa a través de la superficie compensadora. Debido a las diferentes propiedades de la superficie conjugada y la superficie de compensación en la placa de fase, generarán respectivamente una cierta diferencia de fase y una reducción de intensidad de la luz que pasa a través de estas dos partes. Luego, los dos conjuntos de luz convergerán a través de la lente trasera y viajarán por el mismo camino óptico, provocando interferencia entre la luz directa y la difractada, cambiando la diferencia de fase en diferencia de amplitud. De esta manera, durante la microscopía de contraste de fase, la diferencia de fase que el ojo humano no puede distinguir se convierte en una diferencia de amplitud (diferencia de brillo) que el ojo humano puede distinguir a través de la luz de un cuerpo transparente incoloro.
