Comparación del microscopio confocal y el microscopio óptico ordinario.
El microscopio es la principal herramienta para observar las células. Dependiendo de la fuente de luz, se puede dividir en dos categorías: microscopio óptico y microscopio electrónico. El primero utiliza luz visible (microscopio ultravioleta a luz ultravioleta) como fuente de luz, mientras que el segundo utiliza un haz de electrones como fuente de luz. El microscopio óptico ordinario y el microscopio confocal láser pertenecen al mismo microscopio óptico.
I. Microscopio óptico general
El microscopio biológico ordinario consta de tres partes, a saber: ① sistema de iluminación, que incluye fuente de luz y condensador; ② el sistema de aumento óptico, que consta de objetivos y oculares, es el cuerpo principal del microscopio; para eliminar la aberración esférica y la aberración cromática, los oculares y objetivos se componen de un grupo de lentes complejo; ③ dispositivo mecánico, utilizado para fijar el material y observar la conveniencia.
El objeto del microscopio es claro no solo determinado por el aumento, sino también por el poder de resolución del microscopio (resolución), el poder de resolución se refiere a que el microscopio (o el ojo humano del objetivo de 25 cm) puede distinguir el objeto zui pequeños intervalos de la capacidad de distinguir el tamaño del poder de resolución está determinado por la longitud de onda de la luz y la velocidad de la boca del espejo y el índice de refracción del medio, expresado en la fórmula:
R=0.61λ /NANA=nsen /2 donde: n=el índice de refracción del medio;=el ángulo de la boca del espejo (muestra en la boca del objetivo del ángulo de tensión), NA=tasa de la boca del espejo (apertura numérica). El ángulo de la boca del espejo siempre debe ser menor que 180°, por lo que el valor zui de sina/2 es necesariamente menor que 1.
El índice de refracción del vidrio utilizado en la producción de lentes ópticas es de 1,65 ~ 1,78; el índice de refracción del medio utilizado cuanto más cerca del vidrio, mejor. Para lentes de objetivo secos, la velocidad del medio para aire y boca de espejo es generalmente 0.05 ~ 0,95; Lente de aceite con aceite de cedro como medio, la tasa de boca de espejo puede estar cerca de 1,5.
Longitud de onda de luz ordinaria de 400~700 nm, por lo que el valor del poder de resolución del microscopio no será inferior a 0,2 μm, el poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm, por lo que el diseño general del microscopio zui magnificación suele ser 1000X.
En segundo lugar, microscopio de barrido confocal láser.
Microscopio de escaneo confocal con láser (microscopio de escaneo confocal con láser), con un láser como fuente de luz de escaneo, punto por punto, línea por línea, superficie por superficie, imágenes de escaneo rápido, láser de escaneo y recolección de fluorescencia de un objetivo común, punto de enfoque del láser de escaneo objetivo , sino también una imagen instantánea del punto del objeto. Debido a la longitud de onda más corta del rayo láser, el rayo es muy fino, por lo que el microscopio de barrido láser confocal tiene una alta resolución, aproximadamente 3 veces mayor que la de un microscopio óptico común. El sistema se enfoca una vez y el escaneo se limita a un plano de la muestra. Cuando la profundidad de enfoque no es la misma, se pueden obtener imágenes de diferentes niveles de profundidad de la muestra, y esta información de la imagen se almacena en la computadora, mediante análisis y simulación por computadora, puede mostrar la estructura tridimensional de la muestra celular. .
