Aplicación y uso de los principios del microscopio de fluorescencia.
Principios y características estructurales de los microscopios de fluorescencia: Los microscopios de fluorescencia utilizan una fuente de luz puntual con alta eficiencia luminosa para emitir luz de una determinada longitud de onda (como luz ultravioleta de 3650 pulgadas o luz azul violeta de 4200 pulgadas) a través de un sistema de filtro de color como luz de excitación para excitar la fluorescencia en la muestra. Después de que la sustancia emite fluorescencia de varios colores, se observa a través del aumento de la lente del objetivo y el ocular. De esta forma, bajo un fondo de fuerte contraste, incluso si la fluorescencia es muy débil, es fácil de identificar y tiene una alta sensibilidad. Se utiliza principalmente para el estudio de la estructura y función celular, así como de la composición química. La estructura básica de un microscopio de fluorescencia se compone de un microscopio óptico ordinario más algunos accesorios (como una fuente de luz de fluorescencia, un filtro de excitación, un divisor de haz de dos colores, un filtro de bloqueo, etc.). Fuente de luz fluorescente: generalmente utiliza una lámpara de mercurio de presión ultraalta (50 a 200 W), que puede emitir luz de varias longitudes de onda, pero cada sustancia fluorescente tiene una longitud de onda de excitación que produce la fluorescencia más fuerte, por lo que se utiliza un filtro de excitación (generalmente hay filtros de excitación ultravioleta, violeta, azul y verde), que solo permiten que la luz de excitación de una determinada longitud de onda pase a través e ilumine la muestra, mientras absorbe el resto de la luz. Después de irradiar cada sustancia con luz de excitación, emite fluorescencia visible con una longitud de onda más larga que la longitud de onda de irradiación en un tiempo muy corto. La fluorescencia es específica y generalmente es más débil que la luz de excitación. Para observar la fluorescencia específica, se requiere un filtro de bloqueo (o supresión) detrás de la lente del objetivo. Tiene dos funciones: una es absorber y bloquear la luz de excitación para que no entre en el ocular para evitar alterar la fluorescencia y dañar los ojos; la otra es seleccionar y permitir el paso de una fluorescencia específica para mostrar un color de fluorescencia específico. Los dos filtros deben seleccionarse y utilizarse juntos.
